原位杂交和原位PCR技术在鱼类基因定位中的应用
APPLICATION OF IN SITU HYBRIDIZATION AND IN SITU PCR ON LOCATION OF CENE IN FISHES
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摘要: 染色体原位杂交(in situ hybridization, ISH)是基因物理定位的主要方法之一,它根据核酸分子碱基互补配对的原理,将标记的外源核酸探针与染色体上变性处理后的单链DNA互补配对,再经检测而将靶顺序在染色体上的位置显示出来.原位PCR技术是将原位杂交与PCR技术有机的结合,在原位扩增目的DNA片段,并在原位检测其扩增产物,因而兼有PCR及原位杂交技术二者的优越性:既可以同时获得组织及细胞的形态结构信息与分子信息,进行定性、定位分析,又具有比原位杂交更好的敏感性与专一性. 染色体原位杂交和原位PCR这两种技术是基因定位中简便而直接的方法,随着基因组研究和转基因生物研究的深入与与发展,阐明各种基因在染色体上的具体位置愈加重要.本文拟从原位杂交和原位PCR的发展、原理、方法和在鱼类基因的染色体定位等方面进行评述和讨论.